雅各由米所波達米回來後，即在以巴路山與基利心山之間的谷中買下一塊地，並在這裏支搭帳棚，他鑿了一口井，為他自己及他的子孫與牲畜飲用。這口井便一直稱為雅各井。
雅各井位在敘加，近雅各賜給他兒子約瑟之地，（約4：5∼6）這是商旅穿越撒瑪利亞途中必經之歇腳處。北為以巴路山，南為基利心山，距拿伯路，即示劍之東南約六里，亞斯迦之南約一里。雅各井直徑九尺，深七丈五尺；但因客旅喜投石其中，日久井深較昔為淺；其上半為磚砌，下半為灰石，井水甚少，不易汲取。
主耶穌曾在此等候撒瑪利亞婦人，撒瑪利亞婦人亦曾題及，雅各與其子及牲畜，均飲水於此。
主耶穌對那婦人說，『你若知道神的恩賜，和對你說請給我水喝的是誰，你必早求祂，祂也必早給了你活水。』婦人卻回答說，『我們的祖宗雅各，將這井給了我們，他自己和他的子孫並牲畜，也都喝這井裏的水，難道你比他還大麼？』（約4：10，12。）此言既出，表明撒瑪利亞婦人認為雅各井是最好的，雅各是最大的。
主耶穌對撒瑪利亞婦人說，『凡喝這水的，還要再渴。』（約4：13）雅各井裏的水，象徵物質享受和屬世娛樂之消遣，無論如何暢飲，總難免再渴。人之所以無法棄他而去，實因別無解渴之道。主耶穌是活水泉，飲於祂連結於祂就永不枯竭，來到主耶穌這活水井，就滿溢出活水。
公元第四世紀時，在井上建了一座教堂，雅各井剛好位於該教堂地穴中心。
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